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ELISA的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些?解決方法是什么?

 更新時(shí)間:2023-10-17 點(diǎn)擊量:593

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA或ELASA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。那么你知道ELISA的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些?解決方法是什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、高背景或陰性對(duì)照只偏高

原因:

1. 陰性對(duì)照孔被陽(yáng)性對(duì)照貨樣品污染

2. 抗體非特異性結(jié)合

3. 酶結(jié)合物過(guò)濃

4. 孵育溫度過(guò)高

解決方法:

1. 洗滌是,勿將洗液溢出孔外

2. 封閉液不合適,更換封閉液

3. 請(qǐng)檢查酶結(jié)合物是否按說(shuō)明書(shū)規(guī)定稀釋

4. 檢查孵育箱的溫度是否正確、穩(wěn)定

二、標(biāo)準(zhǔn)曲標(biāo)準(zhǔn)曲線良好,但樣本無(wú)檢測(cè)信號(hào)

原因:

1. 樣本中無(wú)檢測(cè)物或檢測(cè)無(wú)含量極低

2. 樣本中其它物質(zhì)影響/掩蓋檢測(cè)

3. 樣本中檢測(cè)物濃度過(guò)高,HOOK效應(yīng)導(dǎo)致假低值

解決方法:

1. 設(shè)置內(nèi)參,重新實(shí)驗(yàn)

2. 作適當(dāng)稀釋,降低其它物質(zhì)的干擾,或作系列稀釋,檢測(cè)回收率

3. 適當(dāng)倍數(shù)稀釋樣本,檢測(cè)物濃度盡量在試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)

三、重復(fù)性較差

原因:

1. 微孔中有氣泡

2. 試劑未混勻

3. 樣本中有雜質(zhì)或沉淀物

4. 微孔包被面被吸頭劃破

解決方法:

1. 用針尖挑破氣泡

2. 確保充分混勻試劑

3. 使用前;離心

4. 加液是小心操作

四、假陽(yáng)性反應(yīng)

原因:

1. 洗滌不充分

2. 洗板機(jī)管道堵塞

3. 加結(jié)合物是,灑在微孔邊緣

解決方法:

1. 使用前需檢查洗板機(jī)是否正常工作

2. 需經(jīng)常維護(hù)洗板機(jī)

3. 小心向微孔加入結(jié)合物,加入微孔底部中央,避免與孔壁和邊緣接觸

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